临床基因扩增检验技术教学的点滴体会

临床基因扩增检验技术即我们常说的PCR技术，是分子生物学教学中的一项重要内容，也是临床应用非常广泛的一项技术。这项课程的学习和学生在临床的实习往往是分开进行的。学生在校学习的主要是临床基因扩增检验技术的核酸基本生物化学知识，PCR反应的基本原理、质量控制，临床应用等。当学生进入临床基因扩增实验室实习工作后，他们会感觉到在学校学过的和实际看到的有很大区别，这是由于教学的侧重点不同造成学生对临床基因扩增检验技术的认识不足，操作不够严谨、规范。作为一名在临床PCR实验室工作的技术人员，我们的体会是临床基因扩增检验技术的教学要紧密结合临床，通过对临床基因扩增实验室各个环节地介绍实现对基本理论知识地讲解，这样更有利于学生融会贯通。

1、临床基因扩增实验室开展PCR技术必须具备的基本条件

教育学生对临床基因扩增实验室有一个总体的认识，对学生实行规范、严格的入室教育,是顺利完成教学实习任务的前提和保证[1]。使他们明确临床基因扩增实验室开展PCR技术必须具备的基本条件，即规范的PCR实验室（经卫生部临检中心验收合格）；编写适合本实验室的质量手册；具备经PCR专业知识培训的技术人员；使用有生产批文的PCR试剂。通过对规范的PCR实验室的介绍，使学生了解PCR实验室是要经过国家验收的，实验室的设计、安排都是有严格要求的。

2、通过讲解PCR实验室的操作流程，加深他们对实验室的认识。

PCR实验室有严格的操作流程，进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即准备区→标本制备区→产物分析区，我们在教学过程中一定要重点强调这一流程，在学生头脑中强化这一概念。

3、通过讲解PCR实验室的操作规程，提高学生的生物安全意识。

PCR实验室有严格的操作规程，我们某些实验室人员由于怕麻烦，自己本身就不严格按照PCR实验室的操作规程去做，比如进入实验室不换大衣，不换拖鞋，不带口罩、帽子，随意乱扔污染性废物等。在教学过程中，应对看似小的细节进行强调，加强学生的认识。作为带教老师，我们一定要严格要求自己，给学生作出榜样，同时要严格要求学生做到，使他们有一个严谨的工作态度，养成良好的工作习惯，提高他们的生物安全意识。

4、通过讲解加入内标来避免假阴性结果的出现，帮助学生理解假阴性结果产生的原因及解决办法。

临床标本在核酸提取的过程中，核酸可能丢失，可能残留PCR扩增抑制物，扩增仪孔间温度存在差异，这些原因均可导致扩增出现假阴性结果。要使学生知道，在临床标本进行核酸提取时，加入竞争性或非竞争性内标，可有效地避免假阴性结果的出现[2]。

5、通过讲解HBV DNA和HCV RNA实时荧光PCR检测试剂盒，使学生了解国产与进口试剂相比存在的主要问题

国产HBV DNA和HCV RNA实时荧光PCR检测试剂盒与进口试剂相比存在的主要问题主要表现在三个方面：①灵敏度低，检测结果稳定性差。②过度追求操作的简便化，如对标本未进行核酸纯化，加样量和扩增反应体积过小，没有内标。③不同批次间的试剂稳定性差。

6、通过讲解HBV DNA和HCV RNA检测量值溯源，加强学生对临床PCR实验室的质量控制的认识。

乙肝病毒和丙肝病毒核酸检测没有参考方法，只能通过标准物质来溯源[3]。第一代HBV DNA和HCV RNA检测用国际标准分别于2000年和1997年建立，目前已分别进入第二代和第三代。我国也已经研制了HBV DNA和HCV RNA检测的一级和二级国家标准物质。

以上是我们在临床基因扩增检验技术带教过程中的一些体会，希望教师在今后的教学过程中，能够从临床实际出发兼顾讲授基本理论知识，使学生对临床基因扩增检验技术有更全面的认识，使他们在日后的临床工作中游刃有余。